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CUSTOM SERVICE

免疫印迹实验操作指南

该免疫印迹实验方法仅供参考,由于每个实验使用的试剂不同,并且涉及不同的物种,组织类型及实验应用,实验人员设计应根据具体情况设计实验步骤和改良。

阻断

  1. 使用 5% 脱脂奶粉溶于 1X TBST 作为阻断缓冲液.

  2. 使用足够多的阻断缓冲液确保凝胶被完全覆盖.

  3. 室温下阻断并震荡1小时.

 

冲洗

  1. 1X TBST 中冲洗3次,每次4分钟,然后1X TBS中冲洗 3次,每次4分钟.

  2. 确保在盒子里一直都有足够的冲洗缓冲液.

 

一抗孵育

  1. 将一抗在 TBST中稀释.

  2. 室温下震荡孵育 2 小时.

  3. 时而检查凝胶确认其完全被抗体溶液覆盖.

 

冲洗

  1. 1X TBST 中冲洗3次,每次4分钟,然后1X TBS中冲洗 3次,每次4分钟.

  2. 确保在盒子里一直都有足够的冲洗缓冲液.

 

二抗孵育

  1. 在1X TBST (浓度根据使用的抗体而定) 中制备二抗.

  2. 室温下震荡孵育 1 小时.

  3. 时而检查凝胶确认其完全被抗体溶液覆盖.

 

冲洗

  1. 1X TBST 中冲洗3次,每次4分钟,然后1X TBS中冲洗 3次,每次4分钟.

  2. 确保在盒子里一直都有足够的冲洗缓冲液.

 

检测

ECL检测试剂的用量取决于凝胶的大小. 通常来说, 用量需要足够完全覆盖凝胶.

  1. 1:1 混合溶液 A 和溶液 B.

  2. 用镊子夹起凝胶,轻轻拍在无尘擦纸上,去除凝胶上多余的 Tris.

  3. 把凝胶放在新的干净的盒子里,加入检测试剂,确保凝胶均匀的被覆盖.

  4. 在黑暗中孵育凝胶 5 分钟.

  5. 用镊子夹起凝胶,用无尘擦纸洗掉多余的试剂.

  6. 凝胶成像.


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